摘要：目前正在开发许多免疫疗法来对抗癌症。在这种情况下，溶瘤腺病毒（Onc.Ads）因其独特的肿瘤选择性，安全性和转基因传递能力而发挥了重要作用。Onc.Ads的主要优势是非凡的免疫原性，可导致强烈的T细胞反应，再加上传递治疗性转基因的潜力，可能比目前的其它策略更有效。在这篇综述中，我们徜徉于腺病毒（Ads）和溶瘤腺病毒（Onc.Ads）的世界，重点研究通过肿瘤微环境调节可增强Onc.Ads抗肿瘤功效的各种策略。基于Onc.Ads的治疗策略构成了对抗癌症的额外武器，并且似乎增强了基于常规和免疫检查点抑制剂（ICIs）的治疗方法，从而带来了可喜的前景。
1.简介：腺病毒世界之旅
腺病毒（Ads）的历史始于20世纪，当时发现并鉴定了第一个Ad。多年来，Ad领域研究的相关性不断提高，不仅是为了阐明其致病机制，而且还为开发用于基因和癌症治疗的Ad衍生载体。Ad是具有90nm衣壳和约38kb基因组的非包膜，游离型，溶解性DNA病毒。由于其具有传染性，即具有感染多种细胞类型的能力，Ads衍生的载体已被广泛研究用于基因治疗和作为抗癌药。使用Ad载体的主要优势包括易于遗传修饰，高滴度生产的可能性及其理化稳定性。另外，辅助依赖性腺病毒（HD-Ad）载体具有38kb的容量，可引入大的转基因。这些特性使它们适合用作溶瘤病毒（OVs），只需进行一些简单的遗传操作即可。OVs最初被开发为选择性破坏癌细胞，同时减少了对正常细胞的伤害。近来，已经积累了OVs具有诱导可以克服肿瘤免疫逃避机制的抗肿瘤细胞的免疫反应证据。目前，这被认为是OVs抗肿瘤作用的主要机制。
2.腺病毒（Ad）载体设计
人腺病毒（hAds）是直径为70至nm的非包膜病毒。病毒的外部蛋白质外壳是二十面体，具有20个三角形面，30个边缘和12个顶点，这种对称性在很大程度上由主要的病毒蛋白六邻体构成。hAds是腺病毒科的成员，并被分类为马斯特腺病毒属（Mastadenovirus）。最初有51种人类Ad血清型根据其被特定动物抗血清中和的能力进行分类。这些可以进一步细分为七个物种（或亚组）（从A到G），根据物种B在人类，大鼠和猴子的红细胞聚集能力以及它们在啮齿动物中致癌性的基础上，可以将它们进一步细分为亚种B1和B2。超过30种猿猴腺病毒（sAds）与其人类对应物具有相同的序列同一性，以至于它们也已被包括在人类腺病毒的分类学中，分属于物种B，C，E和G。hAds最初主要是从患有急性高热性呼吸道疾病的军队中分离出来的，随后与许多临床体征相关，包括角膜结膜炎，肠胃炎，肝炎，脑膜脑炎，膀胱炎，上下呼吸道感染，心肌炎，以及非炎性疾病，例如肥胖。hAds感染易于传播，在某些情况下具有高度传染性。尽管临床过程通常是轻度的并且是自限性的，但感染可能导致局部发作，并伴有严重的发作，即使在具有免疫能力的患者中，有时也会导致致命的后果。
Ads通常会在特定区域中被修饰，例如E1，E2A，E3和E4基因（图1）。E1，E2a和E4基因对于载体复制是必不可少的，并与生产细胞系（例如HEK-及其随后修饰的版本）互补；具有上述基因缺失的载体是复制缺陷的，但仍保持诱导针对载体和转基因的强宿主免疫应答的能力。E3基因对于载体复制是必不可少的，并且被删除以增加载体容量。已经开发了Ad载体的升级版本，从而产生了更安全，毒性更小和装载更强的载体。在第一代腺病毒（FG-Ad）载体中，E1基因被删除并被转基因替代；FG-Ad载体的包装能力（8.2kb）受到限制，因为仅删除了有限数量的病毒基因组，因此，插入的转基因可能具有有限的大小。第二代腺病毒（SG-Ad）载体的E1，E3和E2或E4基因缺失，导致还原为具有复制能力的Ad的可能性降低，并且容纳较大转基因的空间增加了（高至10kb）。最后，使用依赖辅助基因的腺病毒（HD-Ad）载体，可以将整个基因组替换为目标DNA。HD-Ad载体仅包含病毒DNA复制和包装所必需的顺式Ads序列，最多可容纳35kb的外源DNA。HD-Ad载体的生产需要一种辅助病毒（HV），该病毒可提供复制所需的所有蛋白质产物[20]，表达Cre重组酶，从而消除了HV基因组包装的可能性。高容纳能力是HD-Ads的主要优势之一，并且具有有效转导多种细胞类型的能力，而与细胞周期无关。病毒基因的完全缺失会减弱细胞毒性和宿主反应，从而导致病毒清除率降低。此外，与腺病毒HV基因组的最小重叠消除了通过重组事件产生野生型（wt）Ad的可能性。
图1.Ad5衍生的载体的类型及其特征：野生型（wt），第一代（FG-Ad），第二代（SG-Ad）和依赖助手的（HD-Ad）。该表格的末尾是Onc.Ad的示意图。
尽管Ads最初是为基因治疗应用中的转基因递送而开发的，但它们已成为抗癌剂的有趣候选者。实际上，开发在肿瘤细胞中选择性复制的复制型Onc.Ads已成为癌症基因治疗的早期创新策略之一。E1A是在早期病毒复制周期中起关键作用的蛋白质，通过启动子控制其在特定癌细胞中过度表达，而在正常组织中不表达，是靶向癌症的第一种策略。后续开发肿瘤选择性Onc.Ads的策略包括表达缺陷型E1A，该缺陷型E1A无法支持正常细胞中的复制，但能够在通常缺乏成视网膜细胞瘤蛋白（pRb）的癌细胞中复制。通过在该基因上缺失24bp（E1A-d24），并在E1A-d24基因之前添加一个E2F启动子，可以获得E1A缺陷Onc.Ads。
Onc.Ads抗肿瘤作用的主要特征在于能够以不同方式诱导针对癌细胞的免疫反应，既调节肿瘤微环境（TME），又通过释放肿瘤相关抗原（TAA）和随后主要由抗原呈递细胞（APC）加工的新抗原。实际上，Onc.Ads会诱导不同类型的免疫原性细胞死亡（ICD），例如坏死，坏死性坏死，烧伤，自噬细胞死亡和免疫原性细胞凋亡。尽管Onc.Ads对体内肿瘤细胞的生长和肿瘤大小有显着影响，但它们通常无法根除整个肿瘤。为了增强Onc.Ads的作用，与表达多种抗肿瘤蛋白的HD-Ad载体进行局部联合给药是一种有前途的策略。确实，Onc.Ads/HD-Ad载体给药的协同作用使HD-Ad载体在癌细胞中得以扩增和包装，并克服了每种病毒的局限性：Onc.Ads的包装能力降低和HD-Ad载体在肿瘤中复制的失效在。
3.探索肿瘤微环境及Onc.Ads对其的调节
自RudolfVirchow发现肿瘤组织中存在白细胞并提出慢性炎症与肿瘤发生之间的联系以来，对实体瘤TME的全面理解引起了研究人员的
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